通過(guò)病毒外殼蛋白ELISA法測(cè)定慢病毒滴度
更新時(shí)間：2023-01-30 瀏覽次數(shù)：603
根據(jù)ZeptoMetrix的p24試驗(yàn)，默克sigma aldrich確定每毫升慢病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)單位（TU/mL）。通過(guò)使用來(lái)自Didier Trono的轉(zhuǎn)換因子，將p24的濃度轉(zhuǎn)換為病毒滴度來(lái)確定滴度計(jì)算方法。每pg p24抗原中有大約1 x 104個(gè)慢病毒的物理微粒。根據(jù)ELISA試驗(yàn)結(jié)果，每pg p24抗原中有100個(gè)轉(zhuǎn)導(dǎo)單位（TU）。
材料
· 靶向選定基因的慢病毒
· 來(lái)自ZeptoMetrix的p24 ELISA
· 計(jì)算器或電子表格程序
實(shí)驗(yàn)方案
1. 稀釋樣品750到3000倍。
2. 使用p24 ELISA試劑盒，并按照制造商的說(shuō)明進(jìn)行操作。
3. 永遠(yuǎn)用空白對(duì)照使讀版器“歸零"。
4. 永遠(yuǎn)使用p24標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校準(zhǔn)。
5. 使用兩種獨(dú)立的稀釋液用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，包括五種濃度和濃度為0的p24。
6. 將標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制成p24濃度比OD450。
7. 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)依從R2> 0.95。
8. 確定斜率m和截距b。（您也可以下載并使用附件中的電子校準(zhǔn)表格。）
9. 根據(jù)以下公式計(jì)算稀釋病毒的滴度TU/mL（您也可以下載并使用附件中的電子表格。）
注意事項(xiàng)
下載附件中的電子表格（95 Kb）以計(jì)算TU/mL。
轉(zhuǎn)換因子推導(dǎo)：
a. （2×103個(gè)分子）×（每PP的24×103 Da p24）=（48×106）
b. 48×106/Avogadro常數(shù)=（48×106）/（6×1023）= 8×10-17 g p24/PP c. 每1×10-16克p24約有1PP d. 每pg p24有1×104 PP
e. 每1000PP有100TU